어떤 요인이 흡광도에 영향을 미칠 것인지?

1. 흡광도와 투과율은 무엇입니까??

나머지 빛은 투과됨, 다시 말해서, 물체를 통과한다, 투과율이라고 불리는 것 (티).
용액에서 더 많은 분석물질이 발견될수록, 투과율이 낮을수록 더 많은 빛이 흡수되기 때문입니다..

2. 흡광도를 측정하는 이유?

생화학에서는, 생물학이나 화학, 분석물이 특정 파장의 빛을 흡수할 때, 개별 원자/분자와 UV Vis 스펙트럼 사이에는 독특한 관계가 존재합니다.. 이 관계는 다음에 사용될 수 있습니다.:

• 정성적 분석 – 특정 물질의 존재 여부 확인.
  예를 들어, 식품 내 농약 잔류물 확인, 수중 COD 등 오염물질 식별, 코로나19 검사 등 핵산 식별.

• 정량분석 – 특정 물질의 양 결정.
  예를 들어, PM2.5와 같은 공기 중 물질의 농도 측정, 화장품 속 수은, 석면 등 유해물질 농도 측정, 유제품의 칼슘 및 단백질 함량 측정.

3. 흡광도는 어떻게 감지됩니까??

• 광원
  빛의 투과율이나 흡수율 측정에서 가장 중요한 것은 광원입니다..
  흡광도 측정을 위해 다양한 광원을 사용할 수 있습니다.. 스펙트럼 파장 범위가 다릅니다., 광학 강도와 광 안정성.

• 적절한 공백
  흡광도 측정의 원하지 않는 흡광도를 수정하려면, 빛의 산란과 같은, 공백은 샘플과 동시에 측정됩니다.. 해당 공백에는 분석의 분석물을 제외한 모든 구성 요소가 포함됩니다..
  사이드 노트: 용액의 입자가 빛을 산란시킵니다., 빛의 경로를 차단하므로 측정된 흡광도 값이 증가합니다., 결과적으로, 감지기에 도달하는 빛의 양이 적음.
• 흡광도 측정 검출기
  UV-VIS 분광 광도계는 Beer-Lambert 법칙을 이용하여 UV-VIS 영역의 흡광도를 측정하도록 설계된 장비입니다.. 큐벳의 시료 용액을 통과하는 빛의 강도를 측정하고 이를 시료를 통과하기 전의 빛의 강도와 비교합니다..

4.흡광도 측정의 이론적 배경

• 큐벳의 감지 경로
  알려진 흡광도 특성을 지닌 관심 분석물질이 포함된 용액을 큐벳에 넣습니다.. 그런 다음 큐벳을 기기 챔버에 삽입합니다., 흡광도 판독기는 샘플을 통과하기 전과 후의 광학 밀도 차이를 계산하여 흡광도를 결정합니다..
  (검출기를 통과하지 못한 빛은 흡수되거나 뿔뿔이 흩어진. 흩어진 부분은 적절한 공백을 측정하여 수정 가능, 관심 물질의 실제 흡광도를 얻기 위해 이 값에서 이 값을 뺍니다.)

• 화학 및 생명 과학의 흡광도
  흡광도 측정 후, 결과는 투과율 또는 광학 밀도로 주어진 값입니다.. 반면, 용액 내 물질의 정량화가 측정의 목표입니다., 그러면 분명한 질문은 알려진 신호를 농도 값으로 변환하는 방법입니다.. 일반적으로, 우리는 그것을 얻기 위해 Beer-Lambert 법칙을 사용할 수 있습니다..
• 비어-람베르트 법칙
  그만큼 비어-램버트 법칙 다른 시약을 추가할 필요 없이 흡수 물질의 정량화가 가능하므로 매우 유용합니다., 흡광도의 관계를 설명합니다., 흡수 물질의 경로 길이 및 농도:
  A=εlc
  A – 흡광도
  ε – 감쇠 종의 몰 감쇠 계수 또는 흡수율 – M‾¹cm‾¹
  l – 광학 경로 길이 – cm
  c - 감쇠종의 농도- 중

농도 사이에는 선형 관계가 있다고 말합니다., 흡광도, 경로 길이 및 몰 광학 계수, 흡광도를 측정하여 용액의 농도를 계산할 수 있습니다..
예를 들어, 표준 큐벳에서 경로 길이는 다음과 같습니다. 1 센티미터. 흡수 물질 및 특정 파장의 경우, 소멸 계수 (이자형) 일정한 특정, 일반적으로 물질의 최대 흡광도, 특정 물질이 특정 파장의 빛을 얼마나 강하게 흡수하는지에 대한 정보를 제공합니다..
예를 들어, 올리고뉴클레오티드의 몰 흡광 계수는 다음과 같습니다. 32.4 µl*cm-1*μg-1. 그러므로, 의 해결책 1 µg/μl 경로 길이의 올리고뉴클레오티드 1 cm의 흡광도는 다음과 같습니다. 32.4 의.

5.흡광도 측정에 영향을 미치는 요소?

• 큐벳 재료가 흡광도에 영향을 줍니까??
  UV 범위에서 측정하는 경우, 핵산이나 NADH에 필요하기 때문에, 측정을 완료하려면 UV 투명 큐벳이 필요합니다.. 그렇지 않으면, 큐벳의 재질이 UV 광선을 흡수하므로 이 흡광도 측정에서 모든 샘플의 최대 흡광도를 얻을 수 있습니다..

다양한 큐벳 소재를 보유하고 있습니다., 그리고 거기에 5 사용하도록 선택할 수 있는 공통 재료, 플라스틱, 유리, UV 석영 (로드 -1-1), VIS 석영 (물 2-2), IR 석영 (JGS-3) 큐벳, 동일한 물질은 동일한 스펙트럼을 전송합니다., 하지만 제작 방식에 따라 빛 투과율이 다릅니다..
예를 들어, JGS-1 석영 유리 소재 큐벳용, 접착 큐벳에는 80% 빛 투과율, 하지만 모두 융합 석영 큐벳에는 83% 빛 투과율, 적용 가능한 최고 온도는 동일하지 않습니다..

• 큐벳 크기가 흡광도에 영향을 줍니까??
  비어-램버트 법칙에 따르면, 소멸 계수 (이자형) 그리고 경로 길이 (엘) 일정하다, 흡광도 (에이) 농도에 비례한다 (기음) 샘플의. ε과 c가 일정할 때, 흡광도는 빛의 경로 길이에 정비례합니다., 이는 큐벳의 내부 너비와도 같습니다..
  경로 길이는 흡광도에 영향을 미칩니다. 더 긴 광로 길이, 빛은 더 많은 용액을 통과해야 합니다., 더 많은 분자나 원자와 충돌할 수 있습니다., 더 많이 흡수되고.
  저농도 시료의 경우, 경로 길이가 짧은 큐벳을 사용하면 분석물이 빛을 충분히 흡수하지 못할 수 있습니다., 그러면 측정이 덜 효과적입니다..
• 샘플량이 흡광도에 영향을 미치나요?
  표준 큐벳의 경우, 큐벳을 약 채우다 80% 테스트하려는 솔루션이 가득 차 있으면 충분합니다..
  그러나 마이크로 석영 셀이나 흐름 큐벳의 경우, 사용하는 샘플은 10-400ul 정도로 작습니다., 그런 다음 큐벳에 빛이 통과할 만큼 충분한 샘플이 있는지 확인하는 것이 중요합니다.. 우리가 전에 말했듯이, 분석물이 충분한 빛을 흡수할 수 없으면 측정의 효율성이 떨어집니다..
• Z-Dimension이 흡광도에 영향을 미칩니까??
  8.5mm, 15mm, 20mm Z 치수는 큐벳 중앙 창에서 큐벳 바닥까지의 공통 거리입니다..
  15mm ZD 검정색 벽 큐벳을 8.5mm Z 높이 기계에 사용하는 경우, 광선은 세포의 검은 벽을 투과하기에는 너무 낮게 방출됩니다, 차단되었기 때문에 의사에게 연락할 수 없습니다., 그러면 당신은 얻을 것이다 0% 광선 투과.

  우리는 아래와 같이 ZD가 다른 다양한 흡수 큐벳을 보유하고 있습니다., 표준 경로 길이 등, 긴 경로 길이, 또는 플로우 셀.

  Z 높이	유형1	코드1	경로길이1	1권	유형2	코드2	경로길이2	2권
  8.5/15/20mm		QM79	10mm	50ul		QB41	10mm	100ul
  8.5mm		QB35	10mm	32ul		QF75	20mm	64ul
  15mm		QB44	10mm	50ul		QB43	10mm	200ul
  15mm		QM56	1/1.5/2/2.5/5/6.5mm	2/3/4/5/10/13ul		QB20	10mm	50/100/200ul

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대개, 이것은 샘플에 있는 기포입니다, 뚜껑에 응결, 먼지, 큐벳 창에 긁힌 자국이나 지문이 있음. 그러므로, 측정 직전에 큐벳을 확인하는 것이 좋습니다..
측정 시 기포의 영향을 줄이기 위해 기포가 없는 New-Arrival 큐벳이 있습니다..

• pH는 흡광도에 어떤 영향을 미칩니까??
  용액의 pH가 변할 때, 용액의 일부 분자에 이온화가 있습니다., 그러면 분자의 구조가 변한다, 흡광도 결정에 영향을 미치는.
  예를 들어, lycium ruthenicum의 안토시아닌 측정용, 단일 PH 환경에서 안토시아닌 농도를 측정하면 정확도가 떨어집니다., pH에 따라 색상과 흡광도가 변하기 때문입니다..

결과적으로, pH 차등법은 리시움 루테니쿰(lycium ruthenicum)의 안토시아닌 농도를 결정하는 더 좋은 방법입니다..

• 온도가 UV Vis 흡광도 분석에 영향을 줍니까??
  온도는 흡광도 값에 영향을 미칩니다..
  다양한 용매의 상호 작용 성능은 다양한 온도에서 정확히 동일하지 않습니다.. 가열 온도, 특히 특정 온도에서 진행되는 일부 반응을 제어하는 ​​효과적인 측정이 중요합니다.. 용액 매개변수는 온도 변화에 따라 변경됩니다.:

  반응 속도-온도가 변하면 반응속도도 변한다. 이로 인해 샘플의 활동이 변경될 수 있습니다.. 효소/생분자 반응은 온도에 매우 민감합니다..
  용질의 용해도-용해도는 온도 변화에 영향을 받습니다.. 용해도가 낮으면 흡수가 부정확해질 수 있습니다..
  용매의 팽창 또는 수축-이는 용액의 농도를 변화시키고 흡광도에 영향을 줄 수 있습니다., 흡광도는 농도와 선형적으로 관련되어 있으므로.
  줄무늬 효과-이 효과는 온도 변화에 따라 발생할 수 있습니다., 실제 흡광도를 변화시킬 수 있는 일련의 대류 전류로 이어집니다..

분광 광도계를 사용하여 물 속 총 질소 측정용, 알칼리성 수용액에서 (>60℃), 과황산칼륨은 분해되어 중황산칼륨과 원자 산소를 생성할 수 있습니다., 그런 다음 NO2-, NH4-, 시료 내 유기 질소는 120-124℃에서 원자 산소에 의해 질산성 질소로 산화될 수 있습니다.. 그리고 이 용액으로 흡광도와 농도를 측정할 수 있습니다..

그러나 온도 제어가 요구 사항을 충족하지 못하는 경우 용액에 잔류 과황산 칼륨이 남아 흡광도에 영향을 미칩니다.. 과황산칼륨은 220nm에서 강한 흡수 피크를 가집니다., 이는 총질소의 흡수파장과 일치한다.. 이러한 흡수 특성은 과황산칼륨의 지속적인 감소에 따라 점차 약화됩니다..

UV Vis 분광 광도법을 위한 고성능 항온 시스템을 사용하여 온도 제어가 가능합니다..

• 미광이 광학 밀도에 어떤 영향을 미칩니 까? (의) 독서?
  미광은 시스템 내에서 다음 파장의 빛으로 정의됩니다. (그림 물감) 의도한 것과는 다르게, 즉,, 미광은 기기의 광원에서 나오지 않고 광학 경로를 따르지 않지만 검출기에 도달합니다., 해당 파장에서 편차를 일으키는.

  그러므로, 검출기에 의해 측정된 광학 밀도가 실제 OD보다 높습니다.. 다시 말해서, 샘플의 측정된 흡광도는 미광 기여로 인해 실제 흡광도보다 낮습니다..
  이러한 시스템에서 미광을 줄이는 한 가지 방법은 이중 단색 장치를 사용하는 것입니다..

6. 위에서 언급한 흡광도에 대한 영향을 줄이는 방법?

우리가 전에 말했듯이, 다른 흡광도 측정에는 다른 pH 및 온도 환경 제어가 필요합니다., 미광은 해결해야 할 정확한 문제를 파악하기 위한 복잡한 주제입니다..

이 부분에서는, 큐벳의 흡광도에 영향을 미치는 요인을 해결해 보겠습니다., 오른쪽 큐벳 선택, 큐벳 사용 및 유지 관리:

• 흡광도 연구에 적합한 흡수 큐벳을 선택하는 방법?
  이전 기사에서, 7 큐벳을 주문할 때 생각해야 할 것들, 우리는 올바른 큐벳을 선택하기 위한 답변을 제공하려고 시도했습니다., 큐벳 재질의 측면에서 지정됩니다., 경로 길이, Z차원, 용량, 커버 유형, 세포 모양 등.
  다음 부분에서 큐벳의 경로 길이 선택에 대한 추가 설명이 있습니다.:

• 큐벳의 올바른 경로 길이를 선택하는 방법?
  큐벳의 적절한 경로 길이는 흡광도 값이 검출기의 동적 범위 내에 있도록 보장하는 것입니다..
  큐벳의 경로 길이 선택은 샘플 농도와 기기 챔버에 따라 달라집니다., 검출의 상부 광경로 길이를 결정하는.

• "긴 경로" 큐벳은 언제 사용할 예정입니까??
  표준 10mm 광경로 길이 셀을 사용하여 측정하기에는 시료의 농도가 너무 낮은 경우, 농축 과정에서 시료가 기화되거나 화학적, 분자적 구조 변화가 일어나는 경우 농축이 어렵습니다., 그런 다음 광학 경로 길이가 더 긴 셀을 사용하여 흡수 측정의 최적 흡수 감도를 활성화합니다..

예를 들어, 긴 경로 길이 셀을 사용한 잘 알려진 연구는 물의 탁도 분석입니다.. 50mm 및 100mm 큐벳은 탁도가 낮은 샘플을 분석하는 데 자주 사용됩니다..

광학 경로 길이가 20mm인 큐벳이 있습니다., 30mm, 40mm, 50mm, 100mm, 및 기타 긴 경로 길이 셀, JGS1 석영으로 만든, 200-2500nm.

우리는 또한 광학 유리로 만들어진 긴 경로 길이의 큐벳을 보유하고 있습니다., 범위는 10-100mm입니다.. 딸깍 하는 소리 여기 더 보려면, 그리고 여기 Glued*를 보려면 .

• "짧은 경로" 큐벳은 언제 사용됩니까??
  일부에 관해서는 고농도 샘플, 희석 후 10mm 표준 경로 길이 셀로 측정 가능.
  그러나 일부 고농도 시료의 경우 쉽게 희석할 수 없습니다., 예를 들어, 분석물질이 용매와 상호작용할 수 있기 때문에, 샘플을 희석하면 흡광도가 변경될 수 있습니다. (즉., 피크 파장의 이동). 이 경우, 짧은 경로 길이의 큐벳은 효과적으로 희석하지 않고 고농도 샘플을 측정하는 데 사용됩니다..

예를 들어, Short Path Length Cell을 이용한 잘 알려진 연구로는 NIR 영역의 용액 분석이 있습니다.. NIR 영역의 흡광도 측정에 10mm 표준 경로 길이 셀을 사용하는 경우, 포화는 종종 용매에 의한 빛 흡수로 인해 발생합니다., 분석물의 흡수를 측정하는 것을 불가능하게 만듭니다.. 그런 다음 용매로 인한 흡수 포화를 방지하기 위해 단거리 길이 셀을 사용합니다..

광 경로 길이가 0.1mm인 단거리 셀이 있습니다., 0.2mm, 0.5mm, 1mm, 2mm, 5mm, 등등.

또한 매크로 창이 있는 짧은 경로 길이의 큐벳도 있습니다., 기밀, 또는 아래와 같이 폭이 좁음.

더 많은 짧은 경로 길이의 큐벳이 있습니다., 1.5mm와 같은, 2.5mm, 3mm, 6mm, 광학 유리 큐벳도 재고가 있습니다.

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큐벳의 재료 선택을 연구한 후, 경로 길이, 용량, Z-Dimension 및 올바른 큐벳 주문, 일회용 큐벳을 사지 않았다면 큐벳을 청소하는 방법을 배워야 할 때입니다.

• 큐벳의 외부 창을 청소하는 방법?
  큐벳에 균열이 있는 경우 즉시 교체해야 합니다., 창문에 칩이나 긁힌 자국, 또는 성능 저하로 인해, 덜 효과적인 결과로 인해 샘플과 시간이 낭비됩니다., 큐벳을 교체하는 비용보다 훨씬 비쌉니다..

하루가 끝나면, 큐벳을 철저히 청소하세요, 완전히 자연 건조시킨 후 큐벳 랙이나 기타 적합한 용기에 보관하세요.. 큐벳이 완전히 건조되지 않고 젖은 상태로 보관된 경우, 측정 표면에 이전 적용 샘플의 잔류물이 남아 있어 건조될 수 있습니다., 이는 후속 측정에 영향을 미칩니다..